么人的吧。。。哎

（7）苜蓿褐斑病 发病初期叶片上出现小圆形或近圆形的褐色病斑，边缘不整齐，后期逐渐在叶 片正面病斑中部出现浅褐色或黑色凸起物（图 4-11 ，A ，B ，C）。子座和子囊盘生 于叶片中央，初期子囊盘生于表皮下，成熟后突破表皮，露出子囊和子囊盘（图 4-11 ，C），子囊孢子单孢，无色，卵形或椭圆形（图 4-11 ，D）。

（6）苜蓿锈病 田间主要感染叶片（图 4-10 ，A），受害叶片两面出现褪绿小斑点，正面病斑 有较大褪绿晕圈，小斑点逐渐隆起呈疱状（图 4-10 ，B），后期表皮破裂，露出棕 红色或铁锈色粉末（图 4-10，C）。夏孢子单孢，球形或宽椭圆形，黄褐色（图 4-10， D）。

生物技术大四狗，想找一份生物相关实习，想问大家有没有推荐的大公司，最好是在江浙（不要沪）对南京金瑞斯有想法，想请问有没有学长学姐去过。#生物##实习##应届生#

在科技部和农业农村部支持下，国家林业和草原局草原研究中心/中国林业科学研究院生态保护与修复研究所草地资源与利用创新团队联合华智生物技术有限公司，利用全球收集的苜蓿种质资源基因组数据，筛选高质量SNP位点，开发了我国首款紫花苜蓿60K cGPS（Genotyping by Pinpoint Sequencing of captured targets）液相育种芯片“苜芯一号”，可应用于苜蓿种质资源遗传多样性评估、品种真实性鉴定、基因定位及挖掘鉴定、全基因组关联分析、分子辅助定向改良和

今年上的生物技术，听说国家会后面重点发展生命科学就报了，现在大一感觉好焦灼

（5）苜蓿炭疽病 茎秆上出现菱形病斑，边缘水渍状（4-9，AB）。初步鉴定病原为（Colletotrichum trifolii Bain & Essary）。

（4）苜蓿春季黑茎病 主要侵染叶片和茎秆（图 4-8，A，B，C），初期为不规则形褐色或黑色病斑， 后期部分病斑椭圆形或不规则形大斑，淡褐色至黑色，有不明显的轮纹（图 4-8， C）。苜蓿茎点霉菌在 PDA 培养基上菌落呈绿色，絮状边缘（图 4-8 ，D），产生大 量黑色颗粒，分生孢子无色，卵形（图 4-8 ，E）。

（3）苜蓿花叶病毒病 植株上部叶片先发病（图 4-7，A），初期叶脉间褪绿，逐渐变黄，病斑不规则 （图 4-7 ，B ，C）。

（2）苜蓿白粉病 苜蓿白粉病在田间叶片和茎秆上全发生，苜蓿被侵染后在叶片上会形成一层絮 状的白色霉层（图 4-6 ，A ，B ，C ，D），田间两种病原豆科内丝白粉菌（Leveillula leguminosarum）和豌豆白粉菌（Erysiphe pisi）均存在。分生孢子多为单个，顶生 于分生孢子梗（图 4-6 ，E），初生分生孢子单孢，无色，长卵圆形（图 4-6 ，F）。

（1）苜蓿霜霉病 发病初期：苜蓿霜霉病常先发生于近顶部小叶上，发病初期出现形状不规则、 边缘不清褪绿小斑（图 4-1）。 发病中期：病斑逐渐变为黄绿色至灰黄色，随着病情发展病斑可达整个叶片（图 4-2）。 发病后期：发病叶片向叶背卷曲，潮湿时叶片背面病斑处出现灰白色霉层（图 4-3）。 病原为鞭毛菌亚门，霜霉属，孢子囊梗单生或丛生，上部二叉状分枝，无色透 明，孢子囊椭圆形、长卵形，无色（图 4-4）。

4.3 试验田发生的病害种类 试验地 1 共发生 5 种病害，分别是苜蓿霜霉病（Peronospora aestivalis）、苜蓿 白粉病（Leveillula leguminosarum & Erysiphe pisi）、苜蓿花叶病毒病（Alfalfa mosaic virus ）、苜蓿春季黑茎病（Phoma medicaginis ）、苜蓿炭疽病（ Colletotrichum truncatum）。 试验地 2 共发生 6 种病害，分别是苜蓿霜霉病（Peronospora aestivalis）、苜蓿 白粉病（Leveillula leguminosarum & Erysiphe pisi）、苜蓿花叶病毒病（Alfalfa mosaic virus）、苜蓿春季黑茎病（Phoma medicaginis）

4.2 不同苜蓿品种的生长状况 不同苜蓿品种的出苗时间基本相同，出苗时间为 2020 年 9 月 15 日；返青时间 为 2021 年 4 月初，SK3010 和 BR4010 的返青时间较早，其余品种均较迟；开花时 间为 2021 年 6 月中旬，开花较早的品种是中兰 1 号；结实时间为 2021 年 7 月初， 28 中国知网 https . //www CKi et 2021 年 8 月下旬 SK3010 种子的成熟率为 10%~60%，巨能种子的成熟率约为 80%， WL354HQ 种子的成熟率约为 10%。

破硬实后，第 5 天重新统计各品种的发芽率，除了 SK3010 和巨能 2，其余 8 个品种的发芽率均有所提高，BR4010 的发芽率提高了 1.34% ，WL354HQ 的发芽 率提高了 4%，陇东苜蓿的发芽率提高了 9.34%，甘农 3 号的发芽率提高了 4%，中 兰 1 号的发芽率提高了 1.33% ，Ks208 的发芽率提高了 5.33% ， Saranac 的发芽率 提高了 2.66% ，Kanza 的发芽率提高了 16%（表 4-3）。由此可见， 硬实是阻碍种子 萌发的重要因素之一。

在培养皿中发芽到第 10 天时，统计了 10 个苜蓿品种未发芽种子的类型及不同 类型所占的比例。结果发现硬实率和发芽畸形率存在显著差异（P＜0.05），新鲜种 子率、死种率、发霉率和破硬实后各品种的发芽率无显著差异（P＞0.05）。硬实率 在 0.00%~21.33%之间，硬实率最高的是 Kanza，为 21.33%，显著高于（P＜0.05） 其余 9 个品种，硬实率最低的是 SK3010 和巨能 2，为 0%（表 4-3）。发芽畸形率 在 0.00%~4.00%之间，巨能 2 的发芽畸形率最高，为 4.00% ，显著（P

在培养皿中发芽到第 10 天时，测定了 10 个苜蓿品种的根长、苗长、根直径、 幼苗鲜重和幼苗干重，结果发现不同苜蓿品种的根长、苗长、根直径、幼苗鲜重和 幼苗干重均 有 所 差 异 。 10 个 苜 蓿 品 种 的 根 长 为 53px~82.75px ， 苗长为 23.75px~41.25px，根直径在 0.25~0.43mm 之间，幼苗鲜重在 31.53mg~39.73mg 之间， 幼苗干重在 0.73mg~1.47mg 之间，其中根长最长的品种是甘农 3 号，根长为 82.75px， 苗长最长的品种是 KS208，为 41.25px，根直径最长的品种是陇东苜蓿

4.1 供试品种的种子质量 通过测定 10 个苜蓿品种的发芽指数和活力指数发现，发芽指数在 31.54~49.10 之间，活力指数在 0.21~0.49 之间，发芽指数和活力指数最高的品种均为 WL354HQ， 此品种的发芽指数和活力指数分别是 31.54 和0.49，显著高于其他品种（P＜0.05）； Kanza 的发芽指数和活力指数均为最低，发芽指数和活力指数分别为 31.54 和 0.21 （表 4-1）。综合以上结果表明，WL354HQ 、SK3010 这两个品种种子活力较高， Saranac 和 Kanza 这 2 个品种的活力较低。

4.1 供试品种的种子质量 供试品种的千粒重在 1.78g~4.19g 之间，其中包衣种子 WL354HQ 的千粒重最 大，为 4.19g ，显著高于其余 9 个未包衣种子（P＜0.05），未包衣种子中，KS208 的千粒重最大，为 2.33g，中兰 1 号最低，为 1.78g（表 4-1）。 10 个苜蓿品种的发芽势和发芽率差异较明显，发芽势范围在 65.33%~97.33% 之间，发芽势最高的品种是 SK3010，为 97.33% ，显著高于其他品种（P＜0.05）， 发芽势最低的品种是 Saranac，发芽势为 65.33% ，其余 8 个品种的发芽势介于 6

3.11.4 聚类分析 选取田间测定的与霜霉病发病相关的 8 个指标，采用组间联接法进行系统聚类 分析（李芳, 2021），获得各品种的聚类结果，以此来验证隶属值函数标准差系数赋 予权重法和灰色关联度分析法结果的可靠性。

3.11.3 灰色关联度分析 将 10 个苜蓿品种作为一个灰色系统，将 10 个苜蓿品种对霜霉病的抗性植株比 例、出苗率、株高、分枝数、茎基部直径、单株鲜重、单株干重 7 个指标作为该系 统中的 7 个因素，首先对所得的试验数据进行无量钢化处理，计算原始数值(Xi)与 标准值(X0=1)的绝对差值，第 i 个品种在第 ƞ 个指标上的绝对值用Δi(ƞ)表示，并计 算出关联系数、关联度及权重，将最大与最小绝对值带入公式得到关联系数(ρ=0.5)： 每个指标的关联度除以每

本人是大二生技专业的学生，其实当初报专业的时候也是什么都不懂，想着喜欢生物就报了，大一的时候考虑到就业形势不好就一直想转专业，大一期末考试成

有没有本专业行业内的人啊，统计调查作业，留个姓名，职业，和现居单位，剩下的交给我自己来搞就行，救救孩子吧（本科生，研究生，就职人员都行）😭😭😭

rt，学校破壁安排，生涯规划要访谈，吧里有无正在本专业行业内的吧友，或者本专业的硕士，博士生让我访谈一下，大概10分钟…… 求求了，这真的很重要

3.5 播种 播种前使用机器进行犁地，将地犁好后，铺上黑色地布，并用土将地布压实， 避免被风刮起来。按照布局图用绳子圈定试验地边际，用绳子将 8 个小区标记好， 每个小区由北向南用绳子拉 10 条线，由东向西 10 条线，确定种植的植株在一条线 上。 试验地 1 于 2020 年 8 月 25 日进行播种，穴播，每穴 5 粒。株距 1250px ，即 1m 长的行播种 2 穴，间隔 1250px 的行上播种另一个品种。播种时， 用木工刀在播种的 点上切开 125px 的小口，用铲子把土挖松

3.6 播种后管理 试验地 1 于 2021 年 5 月 1 日进行间苗，5 月灌溉春水，越冬前，拉水浇灌， 覆盖了亚麻秸秆，以防冻害，返青前揭开秸秆。2021 年 5 月 25 日按照 87kg/hm2 的标准单施尿素。分别于 2021 年 5 月、6 月、8 月和 10 月进行了除草工作。 试验地 2 于 2021 年 5 月灌溉春水，2021 年 5 月 25 日按照 87kg/hm2 的标准单 施尿素。2021 年 6 月 4 日进行了间苗和移苗，移苗后拉水进行了浇灌。分别于 2021 年 6 月、8 月和 10 月进行了除草工作。2021 年 10 月灌溉冬水

3.11.2 隶属函数分析 评价指标主要有发病率、病情指数、出苗率、株高、分枝数、茎基部直径、单 株鲜重和单株干重。 具体步骤如下：（曹师, 2020; 陈德明等, 2002; 李彦忠等, 2021） 采用公式（1）计算各个指标的隶属函数值。 (1) 公式中，μ (Xj)代表第j个指标的隶属函数值，Xj 表示第j个指标值，Xmin 表 示第 j 个指标的最小值；Xmax 则表示第 j 个指标的最大值。如果指标与品种综合 特性之间呈正相关时用公式（1）计算该指标的隶属函数值，若指标与品种

3.11 数据处理与分析 首先，对测得的各种指标用 Excel2010 进行处理。其次，使用 SPSS 25.0 软件 对所得数据进行统计与分析，获得所有指标的平均值以及标准误差，将其作为测定 的结果，随之采用 Duncan 法进行事后多重比较。在 Excel2010 中，对所得数据进 行隶属函数分析以及灰色关联度分析。最后， 使用 SPSS 25.0 软件进行两变量相关 性分析和聚类分析。用 Excel2010 进行制图。 3.11.1 相关性分析 将所得数据输入 SPSS 中运用两变量相关分析法进行分析。

3.9 开花前对抗病性不强的品种进行刈割 依据出苗后到开花前的发病率与病情指数，明确不同品种的抗病性，开花前对 抗病性不强的品种进行刈割，保留抗病较强品种，使保留品种自然授粉，收获 F1 代。 试验地 1 开花前刈割品种为 BR4010、甘农 3 号、中兰 1 号和陇东苜蓿，保留 品种为 SK3010、巨能 2 和 WL354HQ。试验地 2 由于种植当年未开花结实，故未 进行刈割。 3.10 未刈割品种的种子收获 试验地 1 于 2021 年 8 月进行收种，首先每行随机选取 3 个苜蓿植

3.7.3 发病率及病情指数调查 试验地 1 自出苗后共调查 4 次，分别于 2020 年 10 月，2021 年 4 月-6 月进行 了病害调查，试验地 2 出苗后共调查 4 次，分别于 2021 年 6 月-9 月进行了病害调 查，调查时选取小区内所有植株，调查其病害种类，依据发病株数与总株数的比值 计算发病率，根据病情指数分级标准（表 3-2）确定地上病害的病害级别，根据病 害级别计算病情指数。 发病率 (%)=发病株数/总株数×100% 病情指数= ×100 调查总植株数×最高一级代表值 3.8 抗

3.7.2 病害种类确定 根据苜蓿病状大概确定田间发生的病害种类，紧接着观察苜蓿发病部位的病征， 如是否有霉层等，根据经验初步诊断病害，随后每种病害分别采取 20 株以上的典 型发病苜蓿，使用标本夹制作标本，做好记录，带回实验室（张岳阳, 2021）。 将标本夹带回实验室后，选取具有典型症状的标本在体视显微镜下进行观察， 观察发病部位病斑的大小、霉层以及颗粒物等。 在观察到颗粒状物后，在体视镜下 用挑针挑取或者用胶带粘取一小部

3.4 播种前测定指标 千粒重：测定方法为千粒法，将随机挑选的苜蓿种子轻轻倒在种子数粒仪上， 启动种子数粒仪，用种子数粒仪选取 1000 粒种子后，将选取的 1000 粒种子倒在一 次性培养皿中，放在电子天平上去皮称重，每个品种进行 3 次重复（马婷燕等, 2019）。 种子发芽特性：根据国家种子检验工程相关标准（王彦荣, 2001），将灭菌定性 滤纸整齐铺在 225px 一次性培养皿中，每个培养皿中铺两层，用手轻轻按滤纸，使滤纸紧贴培养皿底部，用注射

3.3 试验设计 10 个品种，每个品种 8 个重复（小区），每品种每个小区播种 1 行，穴播，每 穴播种 5 粒，播种后间苗只留 1 株。行长 10m，行宽 0.5m，行距 0.5m，在每个重 复中每个品种的小区采用随机区组分布。整个试验地面积 483 ㎡。 自出苗后每一个月调查一次霜霉病，评价供试品种的抗病性，在开花前根据评 定的抗病级别，仅保留抗病品种的植株，使自然授粉，而将抗病差的品种刈割，以 免开花授粉。

3.1 试验地概况 试验地位于甘肃省永登县上川镇甘露池村，海拔 2100 米，地处北温带内陆地 带干旱区，境内年平均降雨量 31mm，年平均气温 5℃左右，多年平均日照时数为 1709.2h，无霜期平均为 126d。 3.2 供试苜蓿品种 本论文的田间试验共两个，分别为试验 1 和试验 2，其中试验 1 有 7 个品种， 试验 2 有 10 个品种，二者的 7 个品种相同，即试验 2 的品种是在试验 1 品种的基 础上增加了 3 个从美国农业部标准种质库惠赠的品种。在播种试验 1 之时美国的 3

植物组织培养是指将植物体的某个组织分离出来，在实验室条件下进行培养， 使其生长发育。如中苜 8 号是将“武功苜蓿”“和田苜蓿”和“拉达克苜蓿”的愈 伤组织，经 0.3%浓度甲基磺酸乙酯化学诱导剂处理，加 NaCl 胁迫培养基筛选，从 11 个耐盐变异体中再生出 52 颗植株，再将它们在 0.5%浓度的 NaCl 胁迫下，通过 盆栽耐盐筛选，从最终完成生育期的 3 颗耐盐植株上收获的种子后代，采用综合品 种选育等方法而育成的耐盐、丰产苜蓿新品种（全国

2.4.3.3 生物技术育种 随着科学技术的日益发展，生物技术发展迅速。生物技术育种的主要手段有分 子标记技术、转基因工程以及植物组织培养。然而， 我国苜蓿生育育种技术研究较 迟，目前我国没有单纯使用生物技术育成的苜蓿品种。因此， 有目的地将传统育种 方法和生物技术结合，将有效缩短育种周期，可培育出优质、高产、抗病、耐牧的 苜蓿品种（Li and Brummer, 2012）。 分子标记技术是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记。分

雄性不育是指在两性花植物花植物中，雄性器官退化、畸形或者功能丧失的现象。苜蓿雄性不育系于 1958 年被发现，随后在诸多学者的持续努力下，成功培育 出了苜蓿雄性不育系， 由苜蓿雄性不育系杂交形成的杂交种草产量比一般品种高30%左右（杨青川和孙彦, 2011）。

2.4.3.2 杂交育种 杂交育种是当下苜蓿育种工作经常使用的方法，主要手段有品种间杂交、属间 杂交和种间杂交。 不同品种间进行杂交主要采用多元杂交法。例如东苜 2 号紫花苜蓿是以 5 个国 内紫花苜蓿品种和 5 个国外紫花苜蓿品种或资源为亲本，采用品种间杂交和混合选 择方法选育而成的新品种（全国畜牧总站, 2020）。 种间杂交是指在自然条件下同属两个不同个体间进行杂交，从而产生具有两者 优良性状的新变异。 苜蓿属间杂交属于远缘杂交，

2.2.6 苜蓿霜霉病的防治 2.2.6.1 抗病品种选育 利用抗病品种是防治此病害最经济、最主要、最有效的措施（Lambetal., 2006; Peaden et al., 1985）。到目前为止，美国等苜蓿产业发达国家已育成多个高抗霜霉 病的品种，例如、Antane，Birute、Zydrune 、Saranac、Pacer、Thor、WL307、Narragansett、 Umta、KS-80、UC193、K78-10、KS-145、KS-167（Lehman et al., 1988; Sorensen et al., 1983a; Sorensen et al., 1981; Sorensen et al., 1983b; Sorensen et al., 1983; 李彦忠 和南志标, 2015）。然而，我国在苜蓿抗病育种方

2.4.3.1 选择育种 选择育种是指根据人类的需要从大自然中选择符合需求的个体，并通过鉴定培 育新品种的方法（王雪等, 2014）。此方法简单实用， 易于掌握，是苜蓿新品种选育 的重要方法，主要包括单株选择、混合选择和轮回选择等方法。

2.4.3 苜蓿育种方法 1987~2020 年，中国共计育成苜蓿品种 50 个，使用选择育种、杂交育种和生 物技术育成的品种分别为 32 个、15 个和 3 个（表 2-2）。由此可见我国苜蓿育种方 法主要是常规方法，常规方法简单易行，应用较广泛，但培育新品种所需时间较长， 而基因工程等现代生物技术在苜蓿育种上应用时间较短，因此，将常规育种方法和 现代生物技术有效结合将快速推进我国苜蓿育种的进程，缩小我国与美国等发达国 家在苜蓿育种方面的差距。

2.4.2 选育的类型 截止 2020 年 12 月，我国共计 50 个育成品种，育成苜蓿品种的类型主要有抗 寒、抗旱、早熟、高产、耐盐、抗病、抗虫、耐牧根蘖型、耐湿热等（图 2-1）。其 中高产品种 19 个，占32.20%，如甘农 3 号、甘农 6 号、东苜 1 号、中苜 9 号等品 种；抗寒品种 18 个，占30.51%，如公农 1 号、中草 3 号、赤草 1 号等品种。抗旱 品种 6 个，占 10.17%，如图牧 2 号、甘农 7 号等品种；耐盐品种 4 个，占 6.78% ， 如中苜 8 号、草原 2 号等品种；抗虫品种 3

2.4 中国苜蓿的选育 2.4.1 选育的数量 20 世纪 40-50 年代是我国苜蓿品种选育工作的起步阶段，从 20 世纪 80 年代起 开始发展速度较快，参与研究的学者众多。1986 年随着全国牧草品种审定委员会 的成立，我国苜蓿育种工作进入高速发展阶段（杨青川等, 2013）。1987~2020 年， 我国共审定登记苜蓿属品种 109 个，其中我国自主育成的品种有 50 个，从国外引 进的品种有 34 个，地方品种共计 20 个，野生栽培品种有 5 个，育成新品种的速度 较慢。在登记的 109 个

2.3.2 抗病性评价方法 植物抗病性评价方法根据不同分级标准可分为室内鉴定法和田间鉴定法，苗期 鉴定法和成株期鉴定法、单一指标评价和构建综合模型评价等（芦燕, 2008）。目前 国内单一指标评价主要以发病率和病情指数进行评价，通过病情指数得到相对抗性 指数，再根据分级标准得到抗性级别，国外单一指标评价主要以抗性植株比例进行 评价。张园园等（2021）根据病情指数将苜蓿对三线镰刀菌的抗病分为 5 级；李清 清（2019）根据相对抗性指

关于苜蓿抗霜霉病品种选育研究，国外已开展大量工作且育成多个抗病品种， 我国仅有一个高抗霜霉病的品种-中兰 1 号。宋雨阳（2016）于在甘肃省上川镇进 行了 40 个紫花苜蓿品种对茎叶真菌病害的抗性评价实验，研究结果表明甘肃省上 川镇试验地苜蓿霜霉病发生严重，抗病品种占比较大。李春杰等（2000）在高山草 原条件下鉴定了94 个苜蓿品种对霜霉病的抗性级别，结果发现 94 个苜蓿品种中免 疫品种、抗病品种与中抗品种分别是 15 个、8 个和 23

2.3 紫花苜蓿抗病种质的鉴定与筛选方法 2.3.1 抗病性评价进展 防治苜蓿病害最主要的措施是利用抗病品种。目前抗病品种鉴定主要有两种方 法，分别是在指人工接种条件下或者田间病害自然流行条件下，统计病害的发病率 与病情指数，并根据抗性级别分级标准，明确植物对某种病害的抗病级别（曾翠云, 2016; 范鸿雁, 2006）。此项工作是抗病种质资源筛选以及抗病育种等工作的前提， 必不可少（曾翠云, 2016; 陈秀蓉等, 1990）。 在苜蓿抗病性研究方面，