3.4 播种前测定指标
千粒重：测定方法为千粒法，将随机挑选的苜蓿种子轻轻倒在种子数粒仪上， 启动种子数粒仪，用种子数粒仪选取 1000 粒种子后，将选取的 1000 粒种子倒在一 次性培养皿中，放在电子天平上去皮称重，每个品种进行 3 次重复（马婷燕等, 2019）。
种子发芽特性：根据国家种子检验工程相关标准（王彦荣, 2001），将灭菌定性 滤纸整齐铺在 225px 一次性培养皿中，每个培养皿中铺两层，用手轻轻按滤纸，使滤纸紧贴培养皿底部，用注射器吸取适量无菌水，用手慢慢推动注射器，将注射器 中的无菌水慢慢注入到铺有两层定性滤纸的一次性培养皿中，使滤纸保持湿润；用 灭菌镊子夹取种子，将种子先放入 75%的酒精消毒 30 秒，再将种子浸泡在 1%的 次氯酸钠溶液中，浸泡时间为 1 分钟，随后将消毒后的种子放入无菌水中进行冲洗， 冲洗干净后随机选取 25 粒苜蓿种子，用无菌镊子夹取苜蓿种子整齐摆放在铺有两 层滤纸的一次性培养皿中，每个苜蓿品种 3 次重复；接着将装有苜蓿种子的一次性 培养皿随机放入培养箱中，每天定时采用称重法补充发芽床中散失的水分。试验期 间每天定时统计每皿的发芽种子数，在发芽试验进行到第 10 天时，种子停止发芽 后，统计每皿的硬实种子数、畸形种子数、新鲜种子数、发霉种子数以及死种子数 （董文科等, 2017; 马婷燕等, 2019）。并按照以下公式计算相关指标。
发芽率（%）=（发芽终止期发芽种子粒数/供试种子总粒数）×100%（马婷燕 等, 2019）
发芽势（%）=（4d 内供试种子发芽数/供试种子总数）×100%（马婷燕等, 2019） 发芽指数（GI）= ∑(Gt/Dt)（马婷燕等, 2019）
活力指数（VI）=GI×S（马婷燕等, 2019）
式中：Gt 为时间t 日的发芽种子数，Dt 为发芽天数，S 为发芽第 10 天的幼苗 生长量。
幼苗特性：当苜蓿种子在培养皿中发芽到第十天时，用无菌尖头镊子从每个培 养皿中随机夹取 10 个苜蓿幼苗， 首先将随机夹取的苜蓿幼苗放在游标卡尺上 （0.1mm），测量其胚根长、胚芽长以及根直径，其次再用无菌尖头镊子夹取苜蓿 幼苗轻轻放置在电子天平上（万分之一）测定其幼苗鲜重，每皿三次重复。最后将 苜蓿幼苗装到小信封袋中放置在铁的托盘中，随即将装有苜蓿幼苗的托盘放在80℃ 烘箱中进行烘干，烘干至恒重时使用电子天平测定幼苗干重（马婷燕等, 2019）。
未发芽种子类型确定：当供试苜蓿品种在一次性培养皿中发芽到第十天时，统 计计算以下五种类型的种子：（1）畸形种子：指种子在发芽过程中构造成畸形的种 子；（2）硬实种子：指在发芽期间一直保持坚硬没有吸水胀破的种子；（3）死亡种 子：是指在试验期间虽然能够进行吸水胀破但是最终仍然未发芽的种子；（4）发霉 种子：在试验期间发霉的苜蓿种子；（5）新鲜不发芽种子：整个试验期间未发芽但 具有一定硬度，有可能成为正常幼苗的种子（马婷燕等, 2019）。第 11 天，将每皿 中硬实的种子用镊子挑选出来，使用挑针轻轻划破种皮，使用2.5ml 注射器将无菌 水注入划破处，放回原培养皿，接着重新放入培养箱，5 天后再次统计发芽种子数 （马婷燕等, 2019）。
千粒重：测定方法为千粒法，将随机挑选的苜蓿种子轻轻倒在种子数粒仪上， 启动种子数粒仪，用种子数粒仪选取 1000 粒种子后，将选取的 1000 粒种子倒在一 次性培养皿中，放在电子天平上去皮称重，每个品种进行 3 次重复（马婷燕等, 2019）。
种子发芽特性：根据国家种子检验工程相关标准（王彦荣, 2001），将灭菌定性 滤纸整齐铺在 225px 一次性培养皿中，每个培养皿中铺两层，用手轻轻按滤纸，使滤纸紧贴培养皿底部，用注射器吸取适量无菌水，用手慢慢推动注射器，将注射器 中的无菌水慢慢注入到铺有两层定性滤纸的一次性培养皿中，使滤纸保持湿润；用 灭菌镊子夹取种子，将种子先放入 75%的酒精消毒 30 秒，再将种子浸泡在 1%的 次氯酸钠溶液中，浸泡时间为 1 分钟，随后将消毒后的种子放入无菌水中进行冲洗， 冲洗干净后随机选取 25 粒苜蓿种子，用无菌镊子夹取苜蓿种子整齐摆放在铺有两 层滤纸的一次性培养皿中，每个苜蓿品种 3 次重复；接着将装有苜蓿种子的一次性 培养皿随机放入培养箱中，每天定时采用称重法补充发芽床中散失的水分。试验期 间每天定时统计每皿的发芽种子数，在发芽试验进行到第 10 天时，种子停止发芽 后，统计每皿的硬实种子数、畸形种子数、新鲜种子数、发霉种子数以及死种子数 （董文科等, 2017; 马婷燕等, 2019）。并按照以下公式计算相关指标。
发芽率（%）=（发芽终止期发芽种子粒数/供试种子总粒数）×100%（马婷燕 等, 2019）
发芽势（%）=（4d 内供试种子发芽数/供试种子总数）×100%（马婷燕等, 2019） 发芽指数（GI）= ∑(Gt/Dt)（马婷燕等, 2019）
活力指数（VI）=GI×S（马婷燕等, 2019）
式中：Gt 为时间t 日的发芽种子数，Dt 为发芽天数，S 为发芽第 10 天的幼苗 生长量。
幼苗特性：当苜蓿种子在培养皿中发芽到第十天时，用无菌尖头镊子从每个培 养皿中随机夹取 10 个苜蓿幼苗， 首先将随机夹取的苜蓿幼苗放在游标卡尺上 （0.1mm），测量其胚根长、胚芽长以及根直径，其次再用无菌尖头镊子夹取苜蓿 幼苗轻轻放置在电子天平上（万分之一）测定其幼苗鲜重，每皿三次重复。最后将 苜蓿幼苗装到小信封袋中放置在铁的托盘中，随即将装有苜蓿幼苗的托盘放在80℃ 烘箱中进行烘干，烘干至恒重时使用电子天平测定幼苗干重（马婷燕等, 2019）。
未发芽种子类型确定：当供试苜蓿品种在一次性培养皿中发芽到第十天时，统 计计算以下五种类型的种子：（1）畸形种子：指种子在发芽过程中构造成畸形的种 子；（2）硬实种子：指在发芽期间一直保持坚硬没有吸水胀破的种子；（3）死亡种 子：是指在试验期间虽然能够进行吸水胀破但是最终仍然未发芽的种子；（4）发霉 种子：在试验期间发霉的苜蓿种子；（5）新鲜不发芽种子：整个试验期间未发芽但 具有一定硬度，有可能成为正常幼苗的种子（马婷燕等, 2019）。第 11 天，将每皿 中硬实的种子用镊子挑选出来，使用挑针轻轻划破种皮，使用2.5ml 注射器将无菌 水注入划破处，放回原培养皿，接着重新放入培养箱，5 天后再次统计发芽种子数 （马婷燕等, 2019）。
