一.实验材料
细胞： HUVEC
培养基： ECM 完全培养基
耗材： 预冷枪头和预冷 96 孔板
其他： 胰酶，PBS ，Matrigengel （ABW 货号： 082704 ，金牌基质胶）
二. 实验步骤
A. 准备基质胶
1. 实验前一天将 Matrigel 置于冰盒中， 放入 4℃冰箱，使胶能过夜缓慢融化。（注意： 同样要准备一些 4℃预冷的枪头用于吸取 Matrigel）
2. 开始实验前，将 Matrigel 始终保持放在冰盒中。
3、冰上操作。matrigel 用预冷枪头混匀。
B. 铺基质胶 4. 96 孔板提前预冷，每孔加入 50ul matrigel，避免产生气泡。在 37℃培养箱箱放置 45 分钟。（注意 枪头要垂直于内孔的正上方加入 Matrigel，防止有 Matrigel 流经孔壁而留下残留胶。）
C. 铺细胞
1. 当 HUVEC 细胞长满 70~80%时， 消化下来， 并用含 10%FBS 的 DMEM 重悬， 计数， 使每孔加入 50ul 重悬液，浓度为 30000 个细胞/孔，重复三孔。（注意保持枪头垂直在孔的上方，不要接触到下面的凝胶。）
2. 37℃孵箱孵育，四小时后可见血管形成。
D. 采集图像
图 1：HUVEC 正常细胞
图 2. HUVEC 血管形成四小时图片
附件：
1.ABW 基质胶的使用
1.基质胶颜色的变化可能发生在冷冻或解冻 ABW 基质胶药瓶的过程中，由于二氧化碳与重碳酸盐缓冲 液和酚红的相互作用，颜色会从淡黄色变化到深红色。颜色的变化是正常的， 不影响产品功效，在与 5% 的二氧化碳平衡后颜色将消失。
2.在冰上 4°C 解冻 ABW 基质胶。一旦解冻，旋转药瓶以确保材料均匀分散。向药瓶的顶端喷洒 70% 乙醇，并在空气中干燥。将产品放置在冰上，处理时请使用无菌操作。利用预冷的移液管、吸头和管分装 材料，并立即冷冻。避免反复冻融。
2.预防措施
ABW 基质胶在 22°C 到 35°C 将快速凝胶化。请在冰上 4°C 过夜解冻。在使用前请将产品放置
在冰上，当准备使用 ABW 基质胶是，请预冷移液管、吸头和管。
3.包被程序
注意： 一旦凝胶化，ABW Matrigengel基质应该被立即使用。我们推荐至少 10mg/mL 浓度的蛋白和 ABW 基质胶一起使用。ABW 基质胶的浓度是批次特异的，并且以分析证明书为基础。您可以预先检查基质的批 次，通过联系 ABW 来预定适合您蛋白浓度的特定批次的 ABW 基质胶。
按推荐的方法解冻 ABW 基质胶。使用预冷的移液管，均匀的混合。
将 24 孔细胞培养板放置在冰上，向每个孔中加入 0.289 mL 冷冻的 ABW 基质胶(10 mg/mL)。该量对于 覆盖整个生长表面应该是足够的。如果 ABW 基质胶需要稀释到 10 mg/mL，请使用无血清培养基稀释。
在移液管吸取液体加入到每个孔中时，请避免气泡。如果孔中含有气泡，请在 4°C 预冷的离心机中 将培养板离心 300xg，10 分钟。
在 37°C 培养 30-60 分钟。
细胞： HUVEC
培养基： ECM 完全培养基
耗材： 预冷枪头和预冷 96 孔板
其他： 胰酶，PBS ，Matrigengel （ABW 货号： 082704 ，金牌基质胶）
二. 实验步骤
A. 准备基质胶
1. 实验前一天将 Matrigel 置于冰盒中， 放入 4℃冰箱，使胶能过夜缓慢融化。（注意： 同样要准备一些 4℃预冷的枪头用于吸取 Matrigel）
2. 开始实验前，将 Matrigel 始终保持放在冰盒中。
3、冰上操作。matrigel 用预冷枪头混匀。
B. 铺基质胶 4. 96 孔板提前预冷，每孔加入 50ul matrigel，避免产生气泡。在 37℃培养箱箱放置 45 分钟。（注意 枪头要垂直于内孔的正上方加入 Matrigel，防止有 Matrigel 流经孔壁而留下残留胶。）
C. 铺细胞
1. 当 HUVEC 细胞长满 70~80%时， 消化下来， 并用含 10%FBS 的 DMEM 重悬， 计数， 使每孔加入 50ul 重悬液，浓度为 30000 个细胞/孔，重复三孔。（注意保持枪头垂直在孔的上方，不要接触到下面的凝胶。）
2. 37℃孵箱孵育，四小时后可见血管形成。
D. 采集图像
图 1：HUVEC 正常细胞
图 2. HUVEC 血管形成四小时图片
附件：
1.ABW 基质胶的使用
1.基质胶颜色的变化可能发生在冷冻或解冻 ABW 基质胶药瓶的过程中，由于二氧化碳与重碳酸盐缓冲 液和酚红的相互作用，颜色会从淡黄色变化到深红色。颜色的变化是正常的， 不影响产品功效，在与 5% 的二氧化碳平衡后颜色将消失。
2.在冰上 4°C 解冻 ABW 基质胶。一旦解冻，旋转药瓶以确保材料均匀分散。向药瓶的顶端喷洒 70% 乙醇，并在空气中干燥。将产品放置在冰上，处理时请使用无菌操作。利用预冷的移液管、吸头和管分装 材料，并立即冷冻。避免反复冻融。
2.预防措施
ABW 基质胶在 22°C 到 35°C 将快速凝胶化。请在冰上 4°C 过夜解冻。在使用前请将产品放置
在冰上，当准备使用 ABW 基质胶是，请预冷移液管、吸头和管。
3.包被程序
注意： 一旦凝胶化，ABW Matrigengel基质应该被立即使用。我们推荐至少 10mg/mL 浓度的蛋白和 ABW 基质胶一起使用。ABW 基质胶的浓度是批次特异的，并且以分析证明书为基础。您可以预先检查基质的批 次，通过联系 ABW 来预定适合您蛋白浓度的特定批次的 ABW 基质胶。
按推荐的方法解冻 ABW 基质胶。使用预冷的移液管，均匀的混合。
将 24 孔细胞培养板放置在冰上，向每个孔中加入 0.289 mL 冷冻的 ABW 基质胶(10 mg/mL)。该量对于 覆盖整个生长表面应该是足够的。如果 ABW 基质胶需要稀释到 10 mg/mL，请使用无血清培养基稀释。
在移液管吸取液体加入到每个孔中时，请避免气泡。如果孔中含有气泡，请在 4°C 预冷的离心机中 将培养板离心 300xg，10 分钟。
在 37°C 培养 30-60 分钟。
