多肽的浓度测定一直是多肽合成过程中的一个重要组成部分,准确测定多肽的浓度比很多人想的更加复杂,而且事实上也没有一个简单的通用方法能够使用,常用的方法就是称重和紫外线吸收力,以下由多肽合成厂家三羊开肽小编带来详细内容:
1.称重:
这一方法只能提供粗略估量的多肽含量,首先多肽粉末是难以处置的,准确的称量少量的粉末是很大的问题,还有一个问题就是肽含有各种含量的水和即使被大范围冻干后还是有较少水平的反离子,而水的含量一般在5%-20%,有的甚至>40%,实践的含量取决于多肽序列,而反粒子的类型和数量取决于在多肽纯化中使用的溶剂和多肽序列,这些水分子会产生不肯定性,不容忽视。
2.紫外线吸收性:
如果多肽中含有一个酪氨酸或者色氨酸残基,多肽的定量配戏就会变得简单,色氨基在282nm处的摩尔吸光度是5700,而酪氨酸在275nm处的摩尔吸光度是1400,而在0.1N的NaOH中,酪氨酸的-OH基团充沛去质子化,从而使得酪氨酸的吸收峰变成了293nm,在这个条件下其摩尔吸光度就会增加到2400.除此之外我们还要注意的是,如果肽的侧链间有相互作用,那么紫外线的吸收率就会不同。再睡溶液中,这些小的亲水性肽一般采用伸展构象,所有侧链都是完全暴露在溶剂中的,但是如果是长的疏水性的多肽,这种假定就不是完全正确的了,有的时候可以观察到低水平的聚合和折叠,所以我们认为酪氨酸在0.1N的NaOH中,在293nm出的吸光度比较好,在这个条件下,肽是完整变性的,当然也有缺点,那就是用于浓度测定的样品是恢复不了的。
以上就是两种测定多肽浓度的方法,好的情况就是肽中含有色氨酸或者酪氨酸,很容易进行定量剖析,如果没有那就一定要理解肽的浓度,如果您想了解更多有关多肽合成的内容,可以访问三羊开肽的官方网站!
1.称重:
这一方法只能提供粗略估量的多肽含量,首先多肽粉末是难以处置的,准确的称量少量的粉末是很大的问题,还有一个问题就是肽含有各种含量的水和即使被大范围冻干后还是有较少水平的反离子,而水的含量一般在5%-20%,有的甚至>40%,实践的含量取决于多肽序列,而反粒子的类型和数量取决于在多肽纯化中使用的溶剂和多肽序列,这些水分子会产生不肯定性,不容忽视。
2.紫外线吸收性:
如果多肽中含有一个酪氨酸或者色氨酸残基,多肽的定量配戏就会变得简单,色氨基在282nm处的摩尔吸光度是5700,而酪氨酸在275nm处的摩尔吸光度是1400,而在0.1N的NaOH中,酪氨酸的-OH基团充沛去质子化,从而使得酪氨酸的吸收峰变成了293nm,在这个条件下其摩尔吸光度就会增加到2400.除此之外我们还要注意的是,如果肽的侧链间有相互作用,那么紫外线的吸收率就会不同。再睡溶液中,这些小的亲水性肽一般采用伸展构象,所有侧链都是完全暴露在溶剂中的,但是如果是长的疏水性的多肽,这种假定就不是完全正确的了,有的时候可以观察到低水平的聚合和折叠,所以我们认为酪氨酸在0.1N的NaOH中,在293nm出的吸光度比较好,在这个条件下,肽是完整变性的,当然也有缺点,那就是用于浓度测定的样品是恢复不了的。
以上就是两种测定多肽浓度的方法,好的情况就是肽中含有色氨酸或者酪氨酸,很容易进行定量剖析,如果没有那就一定要理解肽的浓度,如果您想了解更多有关多肽合成的内容,可以访问三羊开肽的官方网站!